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新产品jetCRISPR™——用于基因编辑的RNP转染试剂
2017-12-20 15:59  点击:1941
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公司：上海泽迈生物技术有限公司
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姓名：程经理(先生)
地区：上海
地址：上海市吴中路380号
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CRISPR/Cas9核酸酶系统，是一个强大且高特异性的基因编辑工具。CRISPR/Cas9是一个双组分系统，由gRNA引导Cas9核酸酶到基因组的特异性靶向序列，从而进行基因编辑，如突变、插入或删除。

jetCRISPR™是一种全新的专门为CRISPR/Cas9设计的RNP转染试剂，可带来更高的CRISPR基因编辑效率，同时保持佳的细胞活性和状态。快来试试优异的CRISPR/Cas9 RNP转染试剂吧！

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◆ 特别用于Cas9蛋白和gRNA转染

◆ 基因编辑效率高

◆ 细胞活性高，状态好

◆ 快速可靠的基因编辑

◆ 操作简便

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 基因编辑效率高

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jetCRISPR™专为转染RNP(gRNA和Cas9蛋白复合物)而开发，可在多种类型细胞中进行多靶点的Cas9基因编辑。(图1和图2)

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图1: 使用jetCRISPR™，在HeLa细胞中进行基因编辑。


在96孔板中进行HeLa细胞RNP转染，每孔0.3 µl的jetCRISPR™试剂和几种浓度的Cas9蛋白和HPRT1 SgRNA或阴性对照。转染48h后，T7消化产物经2%琼脂糖凝胶电泳分析并用BET染色，用G:Box紫外成像仪(Syngene®)进行成像。图像经Genesnap软件(Syngene®)采集，INDEL%使用Genetools软件(Syngene®)确定。

1: 完整的1083bp片段, 2: 827bp长片段, 3:  256bp短片段.


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图2: jetCRISPR™基因编辑效率优于同类型产品

在96孔板培养的A549和HEK-293细胞中转染RNP，每孔0.3 µl的jetCRISPR™或Lipofectamine® CRISPRMAX™，30 nM RNP(Cas9蛋白和HPRT1 sgRNA)。转染48h后，采用T7核酸内切酶方法计算INDEL%，评估基因编辑效率，INDEL%使用Genetools软件(Syngene®)确定。

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佳的细胞活性

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Polyplus的转染试剂对细胞其柔和，细胞因此能在整个转染过程中保持佳的活性和状态。jetCRISPR™兼容血清和抗生素，因此RNP转染可在利于细胞活性的优化培养条件下进行。 

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图3: jetCRISPR™转染48h后，佳的细胞活性和状态

在96孔板中用30nm RNP(Cas9蛋白和HPRT1 sgRNA)和0.3 µl的jetCRISPR™转染HEK-293和A549细胞，转染48h后，使用phase contrast ZOE Fluorescent Cell Imager (BIORAD®)观察细胞状态。 

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快速可靠的基因编辑

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转染Cas9蛋白比转染质粒， 可以更快的进行基因编辑。使用jetCRISPR™转染Cas9蛋白和gRNA可进行快速可靠的基因编辑(图4)。此外，Cas9蛋白可以比质粒更快从细胞中被清除，从而减少了脱靶效应，可以更特异的进行基因编辑 (Kim S, et al; Genome Research 2014; 24:1012–1019)。

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图4: 在HEK-293细胞中，使用jetCRISPR™进行快速可靠的基因编辑


在HEK-293细胞中进行RNP转染，96孔板每孔30nM RNP(Cas9蛋白和HPRT1 sgRNA)和0.3 µl的jetCRISPR™或0.3 µl的Lipofectamine® CRISPRMAX™。转染48h后，采用T7核酸内切酶方法计算INDEL%，评估基因编辑效率，INDEL%使用Genetools软件(Syngene®)确定。

 

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操作简便

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jetCRISPR™为即用型溶液。RNP转染过程简便：RNP复合体形成、加入转染试剂、再加到孔中。jetCRISPR™适用于正向转染和反向转染，因此可以很方便的根据细胞调整实验操作，以获得效果。使用反向转染操作比正向转染提前一天获得实验结果(图5)。

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图5: jetCRISPR™正向转染和反向转染操作步骤

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产品信息

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产品名称

货号

试剂规格

jetCRISPR™

PT-502-01

0.1 mL

PT-502-07

0.75 mL

PT-502-15

1.5 mL

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应用

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gRNA和Cas9成功进入目标细胞，是基因编辑必不可少的部分。然而，使用无DNA的方案，即Cas9以蛋白/gRNA复合物方式导入细胞，更有吸引力。因为它克服了DNA入核的主要屏障，同时避免不必要的DNA整合。此外，导入Cas9蛋白更容易调控Cas9的表达，从而减少了Cas9核酸酶的脱靶活性。这是为什么科学家们需要可靠的转染试剂，来实现这个应用。

我们为CRISPR实验提供了全套解决方案 (表1和图6):

▬jetCRISPR™转染RNP –蛋白和gRNA共转染

▬jePRIME®用于CRISPR DNA质粒方案

▬jetMESSENGER™用于RNA转染(gRNA和mRNA共转染)

▬in vivo-jetPEI®用于DNA活体转染(Zuckermann et al. (2015) Nat Commun6, 7391; He et al. (2016) PLoSPathog 12. E1005743)

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表1:专为CRISPR实验设计的转染试剂

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图6：为CRISPR实验设计的体外转染试剂

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