适用
北京普华仁生物技术开发有限公司提供的微囊藻毒素检测试剂盒适用于水中微囊藻毒素的定量检测。
检测原理
微囊藻毒素检测试剂盒由可以和微囊藻毒素及微囊藻毒素酶标记物结合的多克隆抗体制成。样品中的微囊藻毒素与微囊藻毒素酶标记物竞争结合数量有限的抗体结点。
检测过程中， 先加入微囊改造毒素酶标记物及含有微囊藻毒素的样品到测试孔中接着加入抗体，酶标记物与样品中的微囊藻毒素竞争结合同样的抗体的结合点。测试孔中包被有抗兔IgG，用于捕获加入的兔抗微囊藻毒素抗体。
孵育30分钟后洗掉小孔中所有没有结合的分子。每孔中加入干净的底物溶液，连接的酶结合物可以将底物转化成蓝色化合物，一个酶分子可以转化多个底物分子。
由于各个孔中抗体可结合位点是相同的，并且加入的微囊藻毒素酶标记物的量也是相同的，样品中微囊藻毒素含量低的则酶标记物结合得多，颜色会显深蓝色。反之，样品中微囊藻毒素含量高的则酶标记物结合得少，颜色会显浅蓝色。
注意：颜色与微囊藻毒素的含量成反比。
较深的颜色=较低的浓度
较浅的颜色=较高的浓度
特性：
特异性
Beacon微囊藻毒素检测试剂盒没有区分微囊藻毒素-LR(作为标准品)及其它类型，然而可以测到微囊藻毒素的其它类型，以下表格中展示的是相关值及交叉反映率（%CR），以下所有浓度均为ppb级。
|
种类 |
%CR |
|
微囊藻毒素-LR |
100 |
|
微囊藻毒素-RR |
87 |
|
微囊藻毒素-YR |
48 |
|
节球藻毒素 |
31 |
试剂盒组成
· 包被有羊抗兔抗体的的微孔板 （12×8条）。
· 阴性对照品一瓶（0ppb微囊藻毒素-LR）。
· 0.1ppb、0.3ppb、0.8ppb、2ppb微囊藻毒素-LR标准品各一瓶。
· 1.0ppb微囊藻毒素质控样品一瓶。
· 微囊藻毒素HRP酶标记物一瓶。
· 兔抗微囊藻毒素抗体溶液一瓶。
· 底物一瓶。
· 停止液一瓶。（注意！1N 盐酸，小心处理）
· 100×清洗液。
注意事项
1. 不用时请将试剂盒储存于4-8℃。
2. 不可冷冻试剂盒，不可使其暴露在大于37℃环境中。
3. 开始实验前，所有试剂达到室温。
4. 不可使用过期试剂。
5. 不同批次的试剂不可混用。
6. 使用确证方法确认阳性样品。
需要的试剂和材料
1. 酶标仪
2. 薄膜
3. 计时器或表
4. 蒸馏水或去离子水
5. 振荡器
检测程序
1. 将所有试剂及样品置于室温下。
2. 从铝箔袋中拿出要求数量的微孔条，放入干燥剂并重新封好袋子以免微孔条受潮。
3. 稀释100倍浓缩清洗液为1倍清洗液，例：取5ml 100倍清洗液到500ml洗瓶中并加入495ml蒸馏水。
4. 吸取50ul酶标记物到微孔板的每个孔中。
5. 吸取50ul标准，阴性对照，样品到对应微孔中，必须保证每种溶液使用干净的吸头吸取，避免交叉污染。
6. 加入50ul抗体溶液到每个小孔中。
7. 快速震荡使孔中的溶液混合，并敷上薄膜，或者微孔板可以放在振荡器上震荡孵育，从而达到在孵育期间持续震荡的效果。
8. 孵育30分钟。
9. 孵育完后，去掉封口膜将微孔中的溶液倒入水槽中，用1倍清洗液清洗完全充满微孔，震荡后倒掉，重复四次，总共五次洗板。在吸水纸上拍打，尽可能将水拍干。
10. 每个微孔中加入100ul底物溶液。
11. 盖上小孔并孵育30分钟。
12. 按照加底物的顺序每孔中加入100ul停止液。停止液为1 N盐酸，需小心操作。
13. 450nm下读板，如果酶标仪有双波长，可同时测605或650nm双波长。
14. 如果酶标仪可以处理数据，可用半对数线性或4参数曲线拟合，如果为手动计算，则可按照以下部分进行。
计算结果
1. 读板之后，求标准，阴性对照，样品的平均吸光度值并按以下方法计算%B0:
标准，阴性对照，样品吸光度值的平均值
%B0 = --------------------------------------------------------
阴性对照的平均吸光值
2. 以%B0为Y轴，以微囊藻毒素标准浓度的半对数值为X轴，绘制曲线。
3. 通过每个样品的B0%，在图上计算出微囊藻毒素的浓度。
4. 如果样品B0%在设定的标准B0%范围之内，就可以得出一个具体的浓度值。如果样品B0%出了范围只能说明样品的浓度大于高浓度的标准或低于低浓度的标准。
质量控制
1． 1.0ppb质控样的%B0值应该处于下面的范围之内：
1.0 ppb Microcystin control 0.80-1.30ppb
2． 样品计算
|
物质 |
吸光度值 |
平均吸光度值 ±SD** |
%RSD |
%B0 |
浓度(ppb) |
|
阴性对照 |
1.478 1.552 |
1.515±0.052 |
3.4 |
100 |
N/A |
|
0.1 |
1.255 1.194 |
1.225±0.043 |
3.5 |
80.8 |
N/A |
|
0.3 |
0.941 0.932 |
0.937±0.006 |
0.68 |
61.8 |
N/A |
|
0.8 |
0.626 0.602 |
0.614±0.017 |
2.7 |
40.5 |
N/A |
|
2.0 |
0.389 0.386 |
0.302±0.008 |
0.54 |
25.6 |
N/A |
|
样品 |
0.610 0.634 |
0.622±0.017 |
2.7 |
31.5 |
0.909 |
北京普华仁生物技术开发有限公司
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