牛肉膏蛋白胨培养基特点及制作步骤您知道吗?
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  • 2022-11-23 14:36

  牛肉膏蛋白胨培养基特点及制作

  由于这种培养基多用于培养细菌,因此,要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性,以利于细菌的生长繁殖。

  牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下:

  牛肉膏 3g

  蛋白胨 10g

  NaCl 5g

  琼脂 15—20g

  水 1000ml

  pH 7.4—7.6

  一、器材

  牛肉膏,蛋白胨, NaCl,琼脂;

  1mol/L NaOH, 1mol/L HCl;

  试管,三角烧瓶,烧杯,量筒,玻棒,培养基分装器,扭力天平,牛角匙,高压蒸汽灭菌锅,pH试纸( pH 5.5—9.0),棉花,牛皮纸,记号笔,麻绳,纱布等。

  二、牛肉膏蛋白胨培养基的制作步骤

  1.称量

  按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上,称量后直接放入水中,这时如稍微加热,牛肉膏便会与称量纸分离,然后立即取出纸片。蛋白胨很易吸潮,在称取时动作要迅速。另外,称药品时严防药品混杂,一把牛角匙用于一种药品,或称取一种药品后,洗净、擦干,再称取另一药品,瓶盖也不要盖错。

  2.溶化

  在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量,用玻棒搅匀,然后,在石棉网上加热使其溶解。待药品完-全溶解后,补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基,将称好的琼脂放入已溶化的药品中,再加热溶化,在琼脂溶化的过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底使烧杯破裂。-后补足所失的水分。

  3.调pH

  在未调pH前,先用pH试纸测量培养基的原始pH值,如果pH偏酸,用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸测其pH值,直至pH达7.6。反之,则用1mol/L HCl进行调节。注意pH值不要调过头,以避免回调,否则,将会影响培养基内各离子的浓度。

  对于有些要求pH值较精-确的微生物,其pH的调节可用酸度计进行(使用方法,可参考有关说明书)。

  4.过滤

  趁热用滤纸或多层纱布过滤,以利结果的观察。一般无特殊要求的情况下,这一步可以省去(本实验无需过滤)。

  5.分装

  按实验要求,可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。

  分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染。

  (1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。

  (2)固体分装分装试管,其装量不超过管高的1/5,灭菌后制成斜面。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。

  (3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。

  6.加塞

  培养基分装完毕后,在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞,以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染,并保-证有良好的通气性能(棉塞制作方法附本实验后面)。

  7.包扎

  加塞后,将全部试管用麻绳捆扎好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期。三角烧瓶加塞后,外包牛皮纸,用麻绳以活结形式扎好,使用时容易解开,同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。

  8.灭菌

  将上述培养基以1.05kg/cm2(15磅/英寸2),121.3℃, 20分钟高压蒸汽灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌,则应放入冰箱内暂存。

  9.搁置斜面

  将灭菌的试管培养基冷至50℃左右,将试管棉塞端搁在玻棒上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。

  10.无菌检查

  将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时,以检查灭菌是否彻-底。

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